Серологический мониторинг - сбор информации о сыворотке крови и входящих в ее состав компонентов, а так же об их участии в защите организма от различных заболеваний. В основе всех серологических исследований лежит специфическая реакция на антиген и антитела.
Серологический мониторинг - сбор информации о сыворотке крови и входящих в ее состав компонентов, а так же об их участии в защите организма от различных заболеваний. В основе всех серологических исследований лежит специфическая реакция на антиген и антитела. Они имеют большое практическое значение, так как по известному антителу (специфической сыворотке, полученной путем иммунизации кролика известным микроорганизмом) можно быстро определить микроорганизм и причину гибели насекомых.
Реакция преципитации. Антиген для реакции преципитации готовят из 10 погибших от гнильца личинок, которых помещают в ступку и добавляют десятикратное количество физиологического раствора (15 мл. для взрослых личинок и 7 мл для трех-четырехдневных личинок).
Реакция преципитации - РП (от лат praecipilo осаждать) - это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах, избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.
Реакцию преципитации ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др. Широкое распространение получили разновидности реакции преципитации в полужидком геле агара или агарозы двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиапьная иммунодиффузия, иммуноэпектрофорез и др.
Личинок тщательно растирают, суспензию нагревают в кипящей бане 15 мин. и фильтруют через асбестовую вату до получения прозрачности фильтрата. Антигеном может быть и прозрачный фильтрат выросшей культуры. Фильтрат разливают по 0,2—0,3 мл. в уленгутовские пробирки и сверху подслаивают такое же количество специфической сыворотки, которая должна быть также прозрачной. Реакцию сопровождают контролями с нормальной сывороткой и специфическими антителами. Реакция протекает при комнатной температуре в течение 15 мин. При положительной реакции через 0,5—2 мин на границе между сывороткой и испытуемым фильтратом образуется тонкое, нежное, голубовато-матовое кольцо.
Реакция агглютинации. Агглютинацией называют склеивание бактерий под влиянием специфической сыворотки в присутствии электролитов (солей среды). Реакцию агглютинации ставят в пробирках или на предметном стекле. При проведении реакции пробирочным методом учет проводят через сутки, а на предметном стекле — через 3—5 мин. Реакция агглютинации при постановке на стекле в каплях называется капельной. Она часто используется для диагностики американского гнильца. Для постановки реакции агглютинации на предметном стекле на один его край пастеровской пипеткой наносят каплю агглютинирующей сыворотки, разведенной физиологическим раствором (0,1 мл сыворотки и 7,9 мл физиологического раствора) в центре нормальной сыворотки, а на другой край — каплю физиологического раствора. В капли вносят такое же количество антигена и хорошо смешивают. В случае положительного диагноза на американский гнилец жидкость с ларвейной сывороткой в течение 10—20 мин просветляется и наблюдается скучивание микроорганизмов в виде мелко-зернистых крупинок.
Реакция иммунодиффузии (РИД) в агаровом геле. Характеризуется она высокой специфичностью и простотой постановки, часто применяется в патологии медоносных пчел для диагностики вирусных болезней.
При постановке реакции иммунодиффузии расплавленный в водяной бане 1 %-ный агар Дифко разливают в чашки Петри слоем 1,5—2 мм. После застывания в агаре стандартным штампом выдавливают лунки диаметром 7 мм в виде шестиугольника. Расстояние между лунками 3—4 мм. Гипериммунной сывороткой заполняют центральную лунку, а две диаметрально противоположные периферические лунки заливают соответствующим контрольным положительным антигеном, в остальные четыре вносят испытываемые антигены. Чашки Петри помещают в эксикатор с водой на дне и оставляют при комнатной температуре. Для контроля параллельно в этой же чашке аналогично ставят реакцию с нормальной сывороткой. Результаты учитывают через 24 ч.
Реакцию считают положительной, если между лункой с антисывороткой и соответствующим испытываемым антигеном образуются одна или две полосы преципитации (в зависимости от буфера растворителя агара), сливающиеся своими концами с полосами преципитации контрольного положительного антигена. В контрольном звене лунок с нормальной сывороткой полос преципитации не образуется.
